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进口凝胶电泳的作用和特性
点击次数:270 发布时间:2019-03-24
       进口凝胶电泳一般采用的是不连续缓冲系统,与连续缓冲系统相比,能够有较高的分辨率。
  浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子较快,甘氨酸根离子较慢,蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率较大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成一稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。此鉴定方法中,蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量,而与所带电荷和分子形状无关。
  进口凝胶电泳的特性:
  (1)在一定浓度时,凝胶透明,有弹性,机械性能好;
  (2)化学性能稳定,与被分离物不起化学反应,在很多溶剂中不溶;
  (3)对pH和温度变化较稳定;
  (4)几乎无吸附和电渗作用,只要Acr纯度高,操作条件一致,则样品分离重复性好;
  (5)样品不易扩散,且用量少,其灵敏度可达10-6ug
  (6)凝胶孔径可调节,根据被分离物的分子量选择合适的浓度,通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径;
  (7)分辨率高,尤其在不连续凝胶电泳中,集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。
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